? 嚙齒動(dòng)物固定的目的是為了快速且均勻地將組織保持于特定的生存狀態(tài)。雖然將組織直接放置在固定液中可以很好地用于小塊組織的固定。但是像完整大腦，心臟這樣的較大樣本會(huì)引起浸入式固定的問(wèn)題，因?yàn)楣潭ㄒ翰⒉粫?huì)以相同的速率到達(dá)組織的所有區(qū)域，而組織往往在固定液進(jìn)入前即發(fā)生缺氧反應(yīng)。利用循環(huán)系統(tǒng)直接灌注固定液的優(yōu)點(diǎn)是化學(xué)物質(zhì)可以使用天然的血管網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)快速到達(dá)生物體的各個(gè)角落以達(dá)到整體固定的效果。一種低成本，快速，可控和統(tǒng)一的固定方法，使用4％多聚甲醛通過(guò)血管系統(tǒng)灌注以獲得大鼠大腦最好的固定。

（1）在手術(shù)之前，通過(guò)腹腔注射阿佛丁維持麻醉。

（2）一旦動(dòng)物到達(dá)手術(shù)所需的麻醉程度，將其放在手術(shù)盤上。

（3）在肋骨下方的體表和腹壁做一個(gè)5-6厘米的側(cè)切口。小心地將肝臟與隔膜分開(kāi)。

（4）使用彎曲的鈍剪刀在隔膜上做一個(gè)小切口，沿著肋骨的整個(gè)長(zhǎng)度繼續(xù)隔膜切口以暴露胸膜腔。

（5）沿著肋骨的一側(cè)放置彎曲的鈍剪刀，小心地移動(dòng)肺部，并通過(guò)肋骨切割至鎖骨。在對(duì)側(cè)進(jìn)行類似的切割。

（6）抬起胸骨，仔細(xì)修剪連接心臟的組織。用止血鉗夾住胸骨尖端，將止血鉗放在頭上。

（7）將灌注針從心尖處扎入左心室，使用止血鉗夾住心臟，可以固定針頭并防止泄漏。

（8）使用剪刀在動(dòng)物的右心房切開(kāi)，以盡可能大的出口，而不會(huì)損壞降主動(dòng)脈。此時(shí)動(dòng)物即準(zhǔn)備好灌注。

（9）灌注生理鹽水至肝臟變白后換4%多聚甲醛毒繼續(xù)灌注，完成灌注后，大鼠應(yīng)為僵硬狀態(tài)。

（10）解剖:利用剪刀取下頭部從頸部到鼻子沿著體表做一個(gè)中線切口，露出顱骨。

?（11）修剪剩下的頸部肌肉，露出顱底;使用剪刀或咬骨鉗去除任何殘留的肌肉。

（12）將一把剪刀的尖端放在一側(cè)的枕骨大孔上，小心地沿著頭骨的內(nèi)表面滑動(dòng)剪刀。

（13）切割延伸到后顱骨表面的遠(yuǎn)端邊緣，在對(duì)側(cè)進(jìn)行相同的切割。使用咬骨鉗清除小腦周圍的頭骨。

（14）當(dāng)尖端從背側(cè)遠(yuǎn)端后角移動(dòng)到顱骨的遠(yuǎn)端前緣時(shí)，小心地沿著顱骨內(nèi)表面滑動(dòng)剪刀，在切割時(shí)注意防止損壞大腦。

（15）使用彎鑷子將顱骨的背面剝離遠(yuǎn)離大腦。

（16）輕輕地將大腦從頭部取出，并將其放入一瓶含有至少10倍于大腦本身體積的固定液中。

（17）將大腦置于4°C固定液中24小時(shí)并適時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)。

灌注效果：灌注成功的最初指標(biāo)是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的四肢的顏色及僵硬度。大腦的大體檢查顯示血管無(wú)血液，在用于染色和組織切片中也是如此。灌注結(jié)果的最終指標(biāo)是組織中超微結(jié)構(gòu)的狀況。