一、動(dòng)物樣品采集、保存和運(yùn)輸（豬、禽）
1.采樣單需填寫畜牧場(chǎng)的名稱、地址、聯(lián)系人、電話。動(dòng)物的品種、日齡、數(shù)量。免疫情況，臨床表現(xiàn)、發(fā)病死亡情況以及治療用藥情況等。
2.非洲豬瘟采血需采全血，抗凝血。不采血清。
3.采樣后無法送檢，需加緩沖液保存。
4.牛、羊選擇頸靜脈采血，于頸靜脈溝上三分之一和中三分之一交界處。
5.豬采用前腔靜脈采血，豬頭向上提拉與地面呈30度以上，頸部氣管兩側(cè)，最凹處進(jìn)針。
6.禽翅靜脈采血，在翅下靜脈處消毒，手持采血針，從無血管處向翅靜脈叢刺入，有血液回流即可。
7.血液傾斜放置2小時(shí)，一般血清就可析出?；蚴褂?000轉(zhuǎn)每分鐘離心機(jī)離心10分鐘，可得所有血清，血清放-20℃凍存，全血放4℃冰箱保存
8.組織樣品采集，要采集病變的器官組織，或病變和健康組織交界處。先采集實(shí)質(zhì)器官，后采污染的器官組織。
9.牛羊O-P液采集，待牛羊綁定后，用消毒過的探杯，隨吞咽動(dòng)作送入食道，輕輕來回抽動(dòng)2-3次，然后取出探杯，即可采集到O-P液。
10.樣品采集穿防護(hù)用具步驟：戴口罩---戴帽子---穿防護(hù)服---戴防護(hù)眼鏡---穿鞋套或者膠鞋---戴手套
11.樣品采集脫防護(hù)用具步驟：摘下防護(hù)眼鏡---脫掉防護(hù)服---摘下手套---脫掉帽子---脫掉膠鞋或鞋套---摘下口罩
12.實(shí)驗(yàn)過程中所產(chǎn)生的廢棄物應(yīng)作無害化處理。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部先進(jìn)行消毒液浸泡消毒，再使用高壓滅菌鍋，預(yù)處理后，移交給專業(yè)的無害無害化處理公司處理。
13.客戶寄送樣品，需留樣15天。
二、樣品的接收、制備、留樣
1.樣品運(yùn)輸需密封、低溫（24h內(nèi)4℃快運(yùn)、24h以上冷凍），細(xì)菌檢測(cè)樣品不能冷凍。
2.樣品登記時(shí)登記信息應(yīng)盡可能詳細(xì)，方便檢測(cè)出問題時(shí)溯源。需檢測(cè)的項(xiàng)目也應(yīng)盡可能的詳細(xì)告知，形成書面報(bào)告，方便溯源。
3.血樣送檢時(shí)未放置填充物，可能導(dǎo)致樣品溶血。寄送時(shí)血清未析出就用2個(gè)冰袋將血樣包裹，會(huì)導(dǎo)致血樣溫度過低冷凍溶血。
4.新鮮組織不加冰袋會(huì)導(dǎo)致腐敗。固定組織寄送時(shí)加冰，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞收縮，無法觀察細(xì)胞狀態(tài)。
5.樣品制備：觀察組織找到合適的部位，找到目標(biāo)兵敗你位置取樣，3個(gè)地方，每個(gè)地方一分為二，一份檢測(cè)，一份留樣
6.血液樣品：采集后，經(jīng)離心機(jī)離心后，取血清，一分為二，血清量少時(shí)貼邊吸出，對(duì)應(yīng)編號(hào)。
7.廢棄物及垃圾，經(jīng)高壓蒸汽121℃30分鐘消毒過，交給無害化公司，做好記錄。
8.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)實(shí)驗(yàn)桌、操作臺(tái)等進(jìn)行清理與消毒。使用酒精及紫外線燈。
9.各樣品按各自要求儲(chǔ)存存放，出報(bào)告15天后可以處理掉。細(xì)菌檢測(cè)的新鮮組織，不進(jìn)行留樣備份。
10.留樣的作用：實(shí)驗(yàn)有問題時(shí)、客戶對(duì)結(jié)果有異議時(shí)可以進(jìn)行復(fù)查。
三、禽病檢測(cè)
1.病毒僅在活細(xì)胞內(nèi)增值。
2.滅活疫苗在體內(nèi)無法增值，???產(chǎn)生表面蛋白抗體。弱毒疫苗在體內(nèi)可以增值，產(chǎn)生表面蛋白抗體和非結(jié)構(gòu)蛋白和內(nèi)部蛋白抗體，
3.血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)：凝集實(shí)驗(yàn)、沉淀實(shí)驗(yàn)、中和實(shí)驗(yàn)、免疫標(biāo)記技術(shù)。
4.凝集試驗(yàn)原理：顆粒型抗原或可溶性抗原，與相應(yīng)的抗體結(jié)合后，在適量電解質(zhì)存在的情況下，可以凝結(jié)成凝集塊。
5.禽流感病毒可凝集紅細(xì)胞，但有抗體存在的情況下，可與禽流感病毒結(jié)合，抑制這種反應(yīng)，未血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn)。
6可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后，在適量電解質(zhì)作用下，可形成肉眼可見的沉淀物，為沉淀實(shí).驗(yàn)。
7.病毒抗原與相應(yīng)中和抗體結(jié)合后，使病毒失去吸附細(xì)胞的作用，使其失去感染力，稱為中和實(shí)驗(yàn)
8.使用酶等示蹤物，對(duì)抗原和抗體標(biāo)記后，進(jìn)行反應(yīng)，借助于熒光顯微鏡、酶標(biāo)儀等儀器，檢查結(jié)果稱為免疫標(biāo)記技術(shù)
9.間接ELISA法優(yōu)點(diǎn)為可用一種酶標(biāo)二抗檢測(cè)各種抗原相應(yīng)的一抗，缺點(diǎn)是交叉反應(yīng)高，反應(yīng)本底高
10.競(jìng)爭(zhēng)ELISA法的優(yōu)點(diǎn)是特異性好，缺點(diǎn)是線性關(guān)系不好，進(jìn)檢測(cè)誘食表位抗體。
四、非洲豬瘟核酸檢測(cè)原理、操作和全流程質(zhì)控要點(diǎn)
1.科學(xué)流程：臨床判斷---采樣---運(yùn)輸---制樣---核酸提取---體系配置---核酸擴(kuò)增---結(jié)果分析---解決方案
2.非瘟特點(diǎn)：所有豬都易感，出血熱。特急型、急性、亞急性和無明顯癥狀
3.非瘟抗原特點(diǎn):潛伏期長(zhǎng)，直接接觸、基因組大、基因型多，I型和II型都多發(fā)，變異毒株多，流行范圍廣。
4.熒光PCR檢測(cè)原理：核酸是遺傳物質(zhì)，核酸的結(jié)構(gòu)是核酸檢測(cè)的理論基礎(chǔ)。特點(diǎn)是雙螺旋結(jié)構(gòu)、半保留復(fù)制、堿基互補(bǔ)配對(duì)。
5.PCR檢測(cè)技術(shù)：普通PCR（定性）、熒光PCR（相對(duì)定量）、數(shù)字PCR（絕對(duì)定量）。
6.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)五要素：DNA聚合酶，Buffer（緩沖液），dNTPs引物、模板
7.核酸檢測(cè)注意事項(xiàng)：人、機(jī)、料、法、環(huán)、測(cè)
8.所有有可能產(chǎn)生氣溶膠的都需要使用生物安全柜，不能使用通風(fēng)櫥。房間有正負(fù)壓通風(fēng)最佳，沒有也可。做實(shí)驗(yàn)時(shí)，不要開啟通風(fēng)。
9.核酸檢測(cè)操作五字訣：溫、混、純、準(zhǔn)、穩(wěn)
19.注意事項(xiàng)：分區(qū)、壓力氣流控制、緩沖走廊、緩沖間、傳遞窗、人流、物流。
五、血清學(xué)檢測(cè)原理、操作和異常問題分析
1.酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)，廣泛用于檢測(cè)各種微量蛋白含量。
2.原理：待檢物與固相載體表面，發(fā)生抗原抗體結(jié)合實(shí)驗(yàn)，洗板洗去結(jié)合物，假如顯色劑，即可根據(jù)顏色深淺，進(jìn)行定性或定量的分析。
3.測(cè)抗原方法：雙抗體夾心法、雙位點(diǎn)一步法、競(jìng)爭(zhēng)法
4.測(cè)抗體方法：間接法、雙抗原夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法、捕獲法
5.試劑盒組成：抗原包被板、樣品稀釋液、20X濃縮洗滌液、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、酶標(biāo)抗體、顯色液A液、B液、終止液、封板膜
6.操作：加樣---孵育---洗滌---顯色---讀數(shù)
7.病毒的血凝特性：病毒能使紅細(xì)胞發(fā)生凝集的特性稱為病毒的血凝特性。本質(zhì)是病毒通過血凝素纖突與紅細(xì)胞表面的相應(yīng)受體發(fā)生特異性結(jié)合的過程
8.HA實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷：完全凝集：紅細(xì)胞呈傘狀分布于孔底。不完全凝集：介于兩者之間。完全不凝集：紅細(xì)胞呈明顯紐扣狀孔底。
9.血凝效價(jià)：能使紅細(xì)胞完全發(fā)生凝集的病毒的最大稀釋倍數(shù)稱為病毒的血凝價(jià)
10.血凝抑制原理：病毒表面的血凝素纖突遇到抗體相結(jié)合后，無法與紅細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合，所以不發(fā)生紅細(xì)胞凝集反應(yīng)。
六、藥敏實(shí)驗(yàn)
1.目的：疫病檢測(cè)與診斷，指導(dǎo)臨床科學(xué)用藥，防止抗生素亂用。
2.高壓滅菌鍋121℃ 15-20分鐘。含糖多的話116℃。
3.培養(yǎng)基：給細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的，由不同營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)組合配置的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，用于細(xì)菌的分離鑒定、純化培養(yǎng)、傳代、菌種保存等。
4.瓊脂凝固臨界溫度42℃，固培養(yǎng)基制作完成后可放置50℃水浴鍋中。
5.溶血能力：α：2mm、β：4-5mm、γ：無溶血環(huán)
6.細(xì)菌的分離鑒定：培養(yǎng)基選擇---樣本處理---平板劃線與培養(yǎng)---菌落形態(tài)觀察---革蘭染色鏡檢---生化鑒定---PCR或測(cè)序---結(jié)果判定。
7.藥敏實(shí)驗(yàn)方法：制片擴(kuò)散法、稀釋法、抗生素濃度梯度法、自動(dòng)化儀器檢測(cè)。
8.操作流程：抗生素選擇---培養(yǎng)基選擇及制備---菌懸液制備---平板涂布---貼藥敏片與培養(yǎng)---結(jié)果觀察及判定
9.質(zhì)控菌株：對(duì)培養(yǎng)基、藥敏片進(jìn)行質(zhì)控、驗(yàn)證操作技術(shù)是否合格。
10.組織不得直接做藥敏實(shí)驗(yàn)。
