多少同學能將 RT-PCR、Realtime-PCR、QPCR區(qū)分開?有多少同學還在犯暈?
什么是?RT-PCR?
RT-PCR就是逆轉(zhuǎn)錄 PCR(reverse transcription PCR)或者稱反轉(zhuǎn)錄PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)的一種廣泛應(yīng)用的變形。在RT-PCR中,一條RNA鏈被逆轉(zhuǎn)錄成為互補DNA,再以此為模板通過PCR進行 DNA擴增。
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那什么是?qPCR、Real-time-PCR?
其實 Rea-ltime-PCR和 qPCR(Quantitative Rea-ltime-PCR )是一碼事,都是實時定量PCR,指的是PCR過程中每個循環(huán)都有數(shù)據(jù)的實時記錄,因此可以對起始模板數(shù)量進行精確的分析。
雖然Real-time PCR(實時熒光定量PCR)和 Reverse transcription PCR(反轉(zhuǎn)錄PCR)看起來都可以縮寫為RT-PCR,但是,國際上的約定俗成的是:RT-PCR特指反轉(zhuǎn)錄PCR,而Real-time PCR一般縮寫為 qPCR(quantitative real-time PCR)
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那什么是 real-time RT-PCR(或RT-qPCR)?
real-time RT-PCR中間的“RT”是 reverse transcription(逆轉(zhuǎn)錄),整個意思就是利用 mRNA 或 總RNA 為模板的實時逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)(quantitative Real-time RT-PCR)。real time RT-PCR指的是 qPCR+RT-PCR的組合,是說將mRNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后再作為模板進行實時熒光PCR分析,因為RT-PCR是可以定性的,但不能進行定量檢測的。
所以不難理解 real-time RT-PCR(RT-qPCR) 就是結(jié)合了熒光定量技術(shù)的反轉(zhuǎn)錄PCR:先從 RNA 反轉(zhuǎn)錄得到 cDNA(RT),然后再用 Real-time PCR進行定量分析(qPCR)。
所以,實時熒光定量PCR,它不僅可以用cDNA作為模板,也可以用基因組DNA等作為模板。
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文章出處以及地址:http://www.biomart.cn/experiment/430/457/463/240494.htm