參考文獻(xiàn)：2011年 BALB/c小鼠腎缺血再灌注損傷模型的建立與評(píng)價(jià)

實(shí)驗(yàn)方法:

應(yīng)用微型動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)腎蒂方法制備BALB/c小鼠IRI模型，取得較為滿意的效果，并觀察了不同的腎臟缺血時(shí)間對(duì)腎IRI的影響。

動(dòng)物分組

31只小鼠根據(jù)腎缺血時(shí)間不同隨機(jī)分為:0 min組對(duì)照組(n=4)、30 min(n=8)、35 min(n=8)和45 min(n=11)3個(gè)實(shí)驗(yàn)組。另取26只小鼠觀察腎缺血45 min生存率，隨機(jī)分為omin對(duì)照組(n=4)和45min實(shí)驗(yàn)組(n=22)。

手術(shù)程序:

小鼠術(shù)前8一12h禁食，應(yīng)用二澳乙醇溶液(200 mg/kg)經(jīng)腹腔內(nèi)注射麻醉。實(shí)驗(yàn)組:沿腹正中線做1.5一2.0 cm的切口，逐層分離皮膚、腹膜，進(jìn)入腹腔，將腸道推向一側(cè)，找到腎蒂后用無損傷微型動(dòng)脈夾迅速阻斷左右腎蒂，可見腎臟由鮮紅變紫黑色，表示夾閉成功，按分組不同持續(xù)夾閉腎蒂不同的時(shí)間，去除動(dòng)脈夾，恢復(fù)血流灌注，可見腎臟迅速由紫黑色變?yōu)轷r紅，恢復(fù)原來顏色，術(shù)畢分層縫合關(guān)閉腹腔。術(shù)后小鼠于24一29℃的環(huán)境保暖，補(bǔ)充水與飼料。術(shù)中應(yīng)用生理鹽水使小鼠保持充分的水化。對(duì)照組:同法打開腹腔并找到腎蒂，但不夾閉’腎蒂。

模型成功與否判定:

造模成功:術(shù)中夾閉雙側(cè)腎蒂后，可見腎臟由鮮紅變紫黑色，去除動(dòng)脈夾，恢復(fù)血流灌注，可見腎臟迅速由紫黑色變?yōu)轷r紅，恢復(fù)原來顏色;并且術(shù)后1~3h，可見小鼠蘇醒，逐漸恢復(fù)正?；顒?dòng)。造模不成功:腎臟恢復(fù)血流后5 min，’腎臟未恢復(fù)正常顏色;或術(shù)中損傷周圍組織或器官;或術(shù)后1~3h，小鼠未蘇醒或死亡。

根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，作者認(rèn)為應(yīng)用微型動(dòng)脈夾夾閉小鼠雙側(cè)腎蒂的方法可制備穩(wěn)定腎IRI模型，雄性小鼠腎缺血35~45 min是造模較為理想的腎缺血時(shí)間，所得模型效果滿意。

人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞通過巨噬細(xì)胞參與修復(fù)腎缺血再灌注損傷研究

實(shí)驗(yàn)方法

• 選用雄性C57BL/6品系小鼠，于術(shù)前飼養(yǎng)于本課題組1周以上，正常進(jìn)食及飲水。
  小鼠按4.0 ml/kg的劑量腹腔注射2%戊巴比妥鈉麻醉后，以俯臥位固定于手術(shù)板上。小鼠背部脊柱兩側(cè)腎區(qū)備皮，酒精消毒后，平行脊柱剪開約1 cm大小的切口。暴露腎臟并鈍性分離腎蒂后，以無損傷微動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)腎蒂達(dá)30 min。若腎臟由鮮紅色轉(zhuǎn)變?yōu)樽虾谏硎救毖晒?。期間，小鼠被置于37℃恒溫毯上以維持體溫恒定，且手術(shù)切口處覆蓋溫生理鹽水浸潤的紗布以防止腎組織脫水。30 min后松開動(dòng)脈夾，可見整個(gè)腎臟在1 min內(nèi)由紫黑色逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)轷r紅色，表示血流再灌注成功。最后，將雙側(cè)腎臟歸位，并縫合傷口。
• 假手術(shù)組小鼠除了不夾閉腎蒂以外，其余手術(shù)操作均與損傷組一致。小鼠具體分組為:假手術(shù)組、PBS對(duì)照組、HFLI細(xì)胞對(duì)照組以及hucMSCs細(xì)胞治療組，每組5只。