基本過程是設(shè)計完sgRNA后需要將sgRNA插入到載體序列中，這個時候就涉及到了插入哪個位點的問題。因為同學(xué)們手中可能有各種各樣的載體，所以在這里確實沒有辦法給同學(xué)們設(shè)置自動化的程序，所以做一個半自動化吧。如導(dǎo)圖所示，選擇酶切位點后，在這個切割位點兩端會有序列（即紅色與藍(lán)色部分所示），將這些序列分別放入到下方的④和⑤的位置（不需要反向互補，程序會自動替你做）。然后，是輸入sgRNA序列，依然有兩種方式：一個是直接放入序列（①），一個是將前一個模塊設(shè)計的結(jié)果或者自己從其他渠道獲得的sgRNAs（從其他渠道獲得的sgRNA，在整理的時候，一個sgRNA一行，不需要fasta格式），放入②，然后在③設(shè)置保存位置并命名文件，之后點擊design即可設(shè)計。輸入結(jié)果包括酶切位點序列（即輸入的那段），sgRNA序列，加上Tm值。在將結(jié)果輸入后，同樣的結(jié)果也會顯示在⑥。