AAV感染肺部的方法有多種，較為常用的方法有鼻內(nèi)滴注法、氣管插管術(shù)、氣管內(nèi)注射，如果對肺部感染AAV的特異性要求較低，也可采用靜脈注射、腹腔注射等方法，當(dāng)進(jìn)行肺癌成瘤實(shí)驗(yàn)時(shí)，也可采用瘤內(nèi)注射的方式。下面對AAV感染肺部常用的三種方法進(jìn)行介紹。
1、鼻內(nèi)滴注法
鼻內(nèi)滴注法是一種直接的AAV感染法，操作簡單且對設(shè)備要求低，對新手實(shí)驗(yàn)員也同樣適用。缺點(diǎn)是AAV顆粒容易沉積在上呼吸道（鼻道、鼻竇和咽）和胃腸道，如果需要有效地感染到下呼吸道，則可能需要更大劑量的AAV才能實(shí)現(xiàn)。
操作步驟
腹腔注射氯胺酮和甲苯噻嗪將小鼠麻醉；注意：為了保持小鼠穩(wěn)定的呼吸頻率，不應(yīng)過度麻醉。
甲按上圖所示兩種方法將小鼠控制好，防止其用嘴呼吸；
乙緩慢滴一滴AAV懸液于小鼠鼻孔內(nèi)壁，待液體被吸入后再滴下一滴，重復(fù)此操作至40μL AAV懸液全部滴完；
使小鼠保持上述姿勢約30~60s，以便AAV懸液充分進(jìn)入下呼吸道；
待小鼠在籠中恢復(fù)10min后，重復(fù)上述操作，再次給藥40μL（每只小鼠共給藥80μL）；
將小鼠放回籠中直至完全清醒。
2、氣管插管術(shù)
口腔氣管插管術(shù)能夠?qū)⒉《据d體直接灌輸入肺中，卻沒有外科手術(shù)的風(fēng)險(xiǎn)，并且避免了上呼吸道的病毒顆粒的損失。由于幾乎所有AAV病毒顆粒都會(huì)到達(dá)肺內(nèi)，所以要嚴(yán)格控制AAV的使用量。同時(shí)，與鼻內(nèi)滴注法相比，口腔氣管插管術(shù)需要一些特殊設(shè)備，操作起來也稍有難度。
操作步驟
腹腔注射氯胺酮和甲苯噻嗪將小鼠麻醉；注意：動(dòng)物必須處于足夠深的麻醉狀態(tài)以防止運(yùn)動(dòng)或?qū)d體的反應(yīng)而打噴嚏或咳嗽；
將小鼠放在垂直支架上，將門牙環(huán)置于小鼠上門牙上，讓老鼠的腹部面向自己；
輕輕地把小鼠舌頭拉出來，并用拇指和食指按住，中指放在小鼠頸部和塑料支架之間；
用食指、拇指在小鼠舌上牽引令其嘴張開，使插管路徑伸直，并用中指在頸后調(diào)整頭部角度；
利用光纖作為光源和引導(dǎo)者，推動(dòng)它通過可視聲帶（如果看不到聲帶，用中指作支撐，輕輕用力拉舌）；
光纖插入后，同時(shí)將導(dǎo)管向前推進(jìn)約5mm，然后勿移動(dòng)導(dǎo)管，取出光纖；
使小鼠平躺，用膠帶將導(dǎo)管固定在小鼠嘴部防止其移動(dòng)，另一端用橡皮泥支撐；
用注射器通過導(dǎo)管輸入80μL AAV；注意：在抽取80μL載體之前，吸取約100μL的空氣至移液管尖，以防止載體的丟失，并促進(jìn)載體深入肺部。
等待5min，使AAV充分進(jìn)入下呼吸道；
把導(dǎo)管移出，將小鼠輕輕從工作臺拿下，并將頭部和胸部用折疊的紙巾小幅度墊高，以保證小鼠順暢的呼吸；
將小鼠放回籠中直至完全清醒。
3、氣管內(nèi)注射
與鼻內(nèi)滴注相比，氣管內(nèi)注射能夠提高AAV進(jìn)入肺部的效率；與口腔氣管插管法相比，設(shè)備更簡單，操作更容易。然而，氣管內(nèi)注射具有極高的外科手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)，包括出血、切口開裂、感染以及較長的恢復(fù)期等。不僅如此，由于小鼠氣管窄小，很容易出現(xiàn)操作失誤，將AAV注射到氣管周圍組織或食管中去。
操作步驟
①腹腔注射氯胺酮和甲苯噻嗪將小鼠麻醉；
②將小鼠以背臥姿勢固定在嚙齒動(dòng)物工作臺上，并將其前爪伸直固定；
③剃除頸部部分區(qū)域的鼠毛，并用碘伏做消毒處理；
④用手術(shù)剪刀在頸部做一個(gè)5~7mm的小切口；
⑤手握鑷子固定住小鼠氣管，另一只手握住注射器，使注射器針頭斜面朝上，與氣管成45°。
注意：一旦針頭插入，輕輕地將針頭向外移動(dòng)，遠(yuǎn)離小鼠身體，確定針頭是否正確地插入氣管。
⑥將40~80μL 的AAV緩慢注入氣管，等待5s后慢慢取出針管；
⑦縫合傷口，將小鼠放回籠中恢復(fù)，直到完全清醒。
三種AAV肺部給藥途徑的比較：
總結(jié)：AAV載體給藥方式應(yīng)根據(jù)研究人員的目標(biāo)位點(diǎn)和技能進(jìn)行選擇。
