腺病毒載體使用指南:什么情況下優(yōu)先用它做基因遞送?

腺病毒載體能感染分裂和非分裂細胞。它適用于體內(nèi)和體外基因傳遞,轉(zhuǎn)染效率高,對外源基因瞬時表達量高。但相對于其他病毒載體系統(tǒng),腺病毒載體在靶細胞中具有相對較高的免疫原性。您應(yīng)考慮以下幾點:

(1)外源基因需要瞬時表達還是穩(wěn)定的基因表達

(2)需轉(zhuǎn)染分裂細胞還是非分裂的細胞

(3)對于靶細胞的潛在免疫原性是否有充分的了解

(4)病毒用來進行體內(nèi)還是體外基因傳遞

當有以下實驗要求時,可以考慮使用腺病毒替代慢病毒:

① 需縮短實驗周期

慢病毒感染效率約 70% 左右,不能直接進行后續(xù)實驗,需篩選穩(wěn)定細胞株,而篩選時間至少為兩周。腺病毒感染效率高,在很多細胞株中的效率可以達到 99%,可直接進行后續(xù)實驗,節(jié)約經(jīng)濟成本和時間成本。

② 需進行動物實驗

用于動物實驗的病毒需具有較高的滴度,才能達到使用小體積注射的目的。以注射 108 病毒顆粒數(shù)為例,目前,慢病毒能達到的高效滴度通常在 10^8 TU/mL 左右,如選用慢病毒約需 1 mL 病毒注射體積,大體積的病毒量對于動物是有害的,尤其是注射腦部。腺病毒的滴度可達 10^11 PFU/mL,應(yīng)用于動物實驗時,每只小鼠只需要 1 μL,而每只大鼠 10 μL 既可。

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