酶工程復習小結(jié)
第一章 緒論
1.酶的發(fā)展史
?????? 1773年，意大利斯帕蘭扎尼發(fā)現(xiàn)了鷹的胃液消化肉塊。
?????? 19世紀歐洲發(fā)現(xiàn)酶的反應(yīng)屬于化學反應(yīng)，與生命活動無關(guān)。
?????? 巴斯德發(fā)現(xiàn)發(fā)酵與活細胞有關(guān)，起發(fā)酵作用的是酵母細胞。
?????? 庫恩將其命名為酶。
?????? 畢希納發(fā)現(xiàn)是一種生物反應(yīng)催化劑。
酶的本質(zhì)研究：最初認為酶是釀酒酵母，后來發(fā)現(xiàn)是一種具有生物催化活性的物質(zhì)，在后來發(fā)現(xiàn)酶是一種蛋白質(zhì)，在后來發(fā)現(xiàn)有些酶是RNA。
?????? ?生物催化劑（Biocatalytics）：通常把來源于生物并且具有催化活性的酶制劑統(tǒng)稱為生物催化劑。生物催化劑除了從生物體分離出來的酶之外，還包括富含酶制劑的細胞碎片、細胞器、喪失生命活性的完整細胞器以及可以增值的活細胞。
?????? 酶工程是利用酶催化的作用，在一定的生物反應(yīng)器當中將原料轉(zhuǎn)化為所需要產(chǎn)品，是酶學理論與微生物技術(shù)的結(jié)合而產(chǎn)生的一門新技術(shù)，是酶的生產(chǎn)與應(yīng)用過程技術(shù)。
?????? 酶的生產(chǎn)：通過各種方法獲得人們所需要的酶的技術(shù)過程。
?????? 酶的應(yīng)用：通過酶的催化作用獲得人們所需要的物質(zhì)或者除去不需要的物質(zhì)的技術(shù)過程。在酶的應(yīng)用過程當中，出現(xiàn)了天然酶的缺陷包括：穩(wěn)定性差（對熱強酸強堿）、酶的分離純化技術(shù)復雜、只能使用一次。
???? 酶的改良：通過各種技術(shù)和方法改良酶的催化特征的技術(shù)過程。包括酶的分子修飾、酶的固定化、酶的非水相催化體系的建立以及酶的定向進化。
?????? 酶工程的三個階段：
酶的提取分離階段（日本的高峰讓吉用米曲霉制備淀粉酶、Rohm動物一張中提取出胃蛋白酶用于皮革洗滌和軟化、木瓜蛋白酶用于啤酒澄清、細菌淀粉酶用于紡織品退漿。
?????? 酶的發(fā)酵生產(chǎn)階段：微生物液體深層發(fā)酵進行淀粉—淀粉酶的改良。
?????? 工程全面化發(fā)展：易錯PCR、DNA重排、基因家族重排、高通量篩選、酶的定向進化。
第二章 酶學知識
1.酶的分類與命名
酶的分類：可以分為蛋白酶和核酸類酶。其中蛋白類酶包括氧化還原酶、轉(zhuǎn)移酶、水解酶、裂合酶、異構(gòu)酶和連接酶六種，核酸酶包括分子內(nèi)核酸酶（自我剪切和酶、自我剪接核酶）和分子間核酸酶（DNA、RNA、多肽、氨基酸）。羊轉(zhuǎn)水裂一臉
酶的命名：習慣命名法：底物加反應(yīng)特性（蛋白酶、淀粉酶）、催化反應(yīng)特征（水解酶）、加來源或特征（木瓜蛋白酶、堿性磷酸酶）
系統(tǒng)命名法：E.C.a.b.c.d
a表示大類即分類當中的六類。
2.酶的組成和特點
單純酶是指簡單酶，只有一種催化成分，單純蛋白質(zhì)，比如：脲酶、淀粉酶、脂肪酶。蛋白質(zhì)的性質(zhì)決定了他的催化活性。
結(jié)合酶或全酶：是指由酶蛋白和輔助因子構(gòu)成的，輔助因子包括金屬離子和小分子物質(zhì)，其中小分子物質(zhì)又包括輔酶和輔基。輔酶結(jié)合比較松弛，輔基結(jié)合比較緊密。一般來說，全酶的酶蛋白決定了底物的專一性，輔助因子決定了反應(yīng)的專一性。
輔助因子的作用：
金屬離子
金屬離子的作用：催化作用，參與三元絡(luò)合物E-M-S的形成，穩(wěn)定蛋白構(gòu)象。根據(jù)金屬離子與酶蛋白的結(jié)合程度可以分為兩種：金屬酶和金屬激活酶。酶蛋白與金屬離子結(jié)合緊密，比如說鐵離子/亞鐵離子、銅離子/亞銅離子。金屬激酶：酶蛋白與金屬離子結(jié)合比較松散，在溶液中酶蛋白與這類離子結(jié)合而被激活。
輔酶和輔基：
輔酶：是指與酶蛋白結(jié)合比較松散那的小分子有機物質(zhì)，通過透析方法可以除去。
輔基：以共價鍵與酶蛋白結(jié)合，不能用透析方法除去，必須使用一定的化學處理才能夠?qū)⒐矁r鍵打開。
酶的組成形式：單體酶、寡聚酶、多酶復合體、多酶融合體。
單體酶：有一條肽鏈組成或者多條肽鏈通過二硫鍵鏈接形成的酶。
寡聚酶：由兩個或兩個以上的與亞基組成的酶。
多酶復合體：由幾種酶通過共價鏈接形成的復合體。其中每一個酶催化一種反應(yīng)所有反應(yīng)依次進行。
多聚融合體：一條多肽鏈上鏈接有多種催化活性的酶，通常是由基因改造形成的。
酶的結(jié)構(gòu)：包括必需基團、結(jié)構(gòu)維持和活性部位（包括結(jié)合基因和催化基因）
3.酶催化
酶催化的特點：催化效率高、高特異性、酶活可調(diào)節(jié)（不同反應(yīng)條件下酶活不同）
催化反應(yīng)的機制：廣義的酸堿催化、共價催化
4.酶反應(yīng)動力學：研究酶促反應(yīng)的速率以及其影響因素的科學。
5.酶活力測定：反應(yīng)條件設(shè)計酶濃度、底物濃度、反應(yīng)體系、條件、樣品、空白和對照。
第三章 酶的蛋白合成
1.中心法則
2.蛋白表達的調(diào)控：
2.1胞內(nèi)蛋白和胞外蛋白的差異：
胞內(nèi)蛋白由細胞質(zhì)內(nèi)游離的核糖體形成，一般來說，不含信號肽，不經(jīng)過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體的加工。胞外蛋白是存在于細胞外的基質(zhì)當中，由細胞合成之后分泌到胞外的蛋白質(zhì)，絕大多數(shù)含有信號肽。
2.2操縱子、調(diào)控子、信號肽、前肽。其中操縱子和信號肽位于目的基因上游。
操縱子：操縱子包括啟動基因、操縱基因以及結(jié)構(gòu)基因，三者緊密相連，操縱子是三者的總稱。很多功能相關(guān)的基因前后鏈接成串，由一個共同的控制區(qū)進行調(diào)控。常見的操縱子包括：乳糖操縱子、色氨酸操縱子等信號肽：蛋白質(zhì)中由特定氨基酸組成的連續(xù)序列，決定蛋白質(zhì)在細胞中的最終定位。在胞外蛋白分泌的過程中至關(guān)重要。
2.3密碼子：mRNA每三個相鄰堿基排列成為一個密碼子，密碼子決定氨基酸的種類，密碼子的排列順序決定氨基酸的排列順序，進而決定蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)。在翻譯過程中會與反密碼子相結(jié)合。免疫原性：指可以引起免疫應(yīng)答的性能。即抗原刺激特定的免疫細胞，使免疫細胞發(fā)生活化、增殖、分化，最終產(chǎn)生特定的免疫細胞的能力。
抗原性：抗原性是指抗原與其誘導的看抗體或致敏淋巴細胞他特異性結(jié)合的能力大小。
蛋白結(jié)構(gòu)包括一級結(jié)構(gòu)、二級結(jié)構(gòu)。
第四章 微生物產(chǎn)酶
1.微生物產(chǎn)酶的流程
1）菌種分離篩選：土樣采集、過濾、輔基、菌落培養(yǎng)、篩選
2）菌種優(yōu)化培育
3）發(fā)酵培養(yǎng)基/發(fā)酵條件的優(yōu)化
4）發(fā)酵產(chǎn)物的分離純化
5）酶制劑的包裝保存
2.微生物產(chǎn)酶的生化機制
1）酶的生物合成的基本過程：轉(zhuǎn)錄和翻譯
2）生物合成的調(diào)節(jié)：
?????? 分解代謝物的阻遏作用
?????? 酶生物合成的誘導作用
?????? 酶生物合成的反饋阻遏作用
3）合成模式：同步合成型、延續(xù)合成型、中期合成型、滯后合成型。（合成模式并不是固定不變的，同一菌種在不同條件下的合成模式可能會不同。）
同步合成型：酶的合成與細胞的生長同步進行，在細胞進入平衡期之后，酶的合成停止。
延續(xù)合成型：酶的合成與細菌的生長同步進行，但是在細菌生長進入平衡期之后，酶還可以繼續(xù)合成一段時間。
中期合成型：酶在細菌生長一段時間之后才開始，在細胞生長達到平衡期之后，酶的合成停止。
滯后合成型：酶合成在細胞生長開始一段時間后，在細胞生長達到平衡期之后，酶的合成還可以繼續(xù)合成一段時間。
3.微生物產(chǎn)酶的影響因素：
優(yōu)化菌株、優(yōu)化培養(yǎng)基、優(yōu)化分離技術(shù)、設(shè)備及條件、控制工藝、其他（添加誘導物、控制阻遏物濃度、添加表面活性劑、添加促進劑）。
誘導物：能夠調(diào)節(jié)啟動子開關(guān)的物質(zhì)稱為誘導物，誘導物可以與調(diào)控蛋白結(jié)合，改變調(diào)控蛋白的空間結(jié)構(gòu)，從而能改變基因轉(zhuǎn)錄翻譯。
阻遏物：一種可以與DNA或者RNA結(jié)合來阻遏轉(zhuǎn)錄翻譯的一種蛋白質(zhì)，與操縱基因結(jié)合之后影響操縱子的蛋白結(jié)構(gòu)，進而影響蛋白質(zhì)合成。
表面活性劑：指具有一定的親水疏水基因，在溶液表面橫向排列，并且可以使表面張力下降的物質(zhì)。促進劑：可以促進產(chǎn)酶，但是并不清楚其原理。
因此，發(fā)酵方式的選擇、了解發(fā)酵特點、培養(yǎng)基的選擇、優(yōu)化工藝、優(yōu)化發(fā)酵條件非常重要。
培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的C/N，碳源、氮源有什么物質(zhì)提供、無機鹽、生長因子
發(fā)酵條件包括pH條件（緩沖體系、培養(yǎng)基中、流體）、溫度（培養(yǎng)溫度、發(fā)酵罐溫度）、溶解氧（氧分壓、通氣量、氣液接觸時間、接觸面積、改變培養(yǎng)液的性質(zhì)）。
4.微生物發(fā)酵的優(yōu)點：
1
）微生物產(chǎn)酶產(chǎn)量高。
2）微生物產(chǎn)酶穩(wěn)定下好。
3）利于培養(yǎng)和管理
4）利于酶的分離純化
5）安全可靠，無毒性。
第五章 微生物菌種改造
1.育種的分子生物學基礎(chǔ)——突變
突變的分子機制：基因突變（堿基替換、移碼突變、易位突變），染色體畸變和染色體組變（缺失和重復、倒位和易位、多倍體三倍體）
遺傳性狀改變：同義和無義突變、錯義突變、移碼突變
突變類型：形態(tài)突變型、生化突變型、條件致死突變型、致死突變型、抗性突變型。
基因突變：基因組DNA發(fā)生突然變化的，可以遺傳的，變異現(xiàn)象。從分子水平來看，就是發(fā)生在堿基序列上的變化。
堿基替換：在DNA分子中，一個堿基被另一個堿基替換的現(xiàn)象。
移碼突變：在正常的DNA分子中，堿基改變非3的倍數(shù)，導致在這個位置后面的所有堿基序列發(fā)生改變，導致堿基編碼移位錯誤的現(xiàn)象就做移碼突變。
易位突變：染色體片段發(fā)生位置改變叫做易位，其中在同一條染色體上的改變叫做移位或者染色體內(nèi)易位，在不同染色體之間發(fā)生叫做染色體間易位。
染色體畸變：染色體畸變包括染色體數(shù)目的畸變和染色體形態(tài)的畸變。
同義突變：又叫沉默突變，是指DNA中的堿基改變導致mRNA的密碼子發(fā)生改變，但是由于密碼子并沒有發(fā)揮作用，氨基酸并沒有發(fā)生改變的突變。
無義突變：DNA的突變導致mRNA中的密碼子改變?yōu)榱硪环N終止密碼子。
錯義突變：DNA中的堿基改變導致mRNA中的密碼子發(fā)生改變，編碼成另一種氨基酸的突變。
形態(tài)突變型：指肉眼可見的突變型，比如說性狀、大小、顏色的突變型。
2.育種前的準備——誘導細胞的選擇
1）單倍體細胞
2）單核或者細胞核盡可能少。
3）誘變劑作用機理選擇細胞狀態(tài)
4）分離純化
注意1）愛固定條件下培養(yǎng)細胞，2）利用成分固定的細胞進行實驗，3）細胞充分分散，4）誘變之后表型延遲
3.育種的一般流程
1）選擇出發(fā)菌株
2）出發(fā)菌株純化
3）制備單孢子
4）誘變劑或者誘變方式的選擇性
5）誘變條件的優(yōu)化
4.菌種篩選
1）篩選流程的確認
2）篩選方法的確定和優(yōu)化
3）篩選培養(yǎng)基
4）產(chǎn)物測定
5）突變菌株的分純
6）突變菌株的工業(yè)化
5.育種的常見方法及原理
1）自然選育：小概率突變
2）經(jīng)典誘變：物理誘變、化學誘變（烷化劑、核酸堿基類似物、抗生素）、復合誘變
產(chǎn)TG酶的菌種紫外誘變（制備孢子處理液、紫外處理、涂布暗箱培養(yǎng)、高通量初篩、搖瓶復篩、工業(yè)發(fā)酵罐放大）
亞硝基胍誘變：原理：烷化劑，是DNA上的堿基和磷酸部分被烷化，DNA復制時導致配對錯誤而引起突變。誘變條件：不同pH的誘變機理不同。
常溫常壓等離子體（ARTPA）常溫常壓等離子體突變，在其中含有多種化學活性成分粒子。
3）基于PCR技術(shù)的突變
隨機突變、定點突變、易錯PCR、基因重排、定向進化（建庫）。
易錯PCR：在采用DNA聚合酶進行PCR時，通過調(diào)整反應(yīng)條件，比如說加入鎂離子、加入錳離子、改變體系中的dNTP、低保真的酶等，來改變基因頻率，以此達到基因突變的效果。
基因重排：將含有不同大小的基因庫切成DNA小片段，小片段之間互為引物進行PCR擴增，擴增含有多個突變位點的基因，轉(zhuǎn)化篩選。
定向進化：突變文庫構(gòu)建（基于易錯PCR以及基因文庫的建立），定向篩選（按照定向有目的篩選），基因鑒定（擴增目標基因，進行鑒定）
PCR對基因的改造缺點：只能對單基因進行改造，一般的酶分子不要過大，只能針對酶本身進行改造，往往適應(yīng)性不好，效果有限。
4）有性選育：雜交育種、原生質(zhì)體融合、基因組重排。
雜交育種：是將父母本雜交之后得到子代，對子代進行選育。
原生質(zhì)體融合：采用人工的方法，將兩個有一定性狀的原生質(zhì)體進行融合從而達到育種目的。
基因組重排：基因組重排需要一個基因庫，然后通過原生質(zhì)體融合的方式將目的基因進行隨即重排。
第六章 酶的分離純化
1.分離純化的概要
1）酶蛋白純化的一般過程：合適的方法選取、蛋白質(zhì)來源及釋放、初步分離、純化、脫鹽濃縮、檢測保存
2）純化常規(guī)需要考慮
量：科研級別（微克）；醫(yī)藥上和工業(yè)上（公斤級），
純度：臨床治療99.9%，食品級安全
原料來源：方便，低成本
破碎條件：溫和，去除雜志、脂質(zhì)、核酸、毒素等物質(zhì)。
純化條件：緩沖體系，蛋白酶，穩(wěn)定性
2.蛋白質(zhì)的初步純化——分離
1）細胞破碎：機械破碎法、化學破碎法、物理破碎法（壓力差、溫度差、超聲）、酶促破碎法。
2）提取：
?????? 鹽溶液提?。蝴熐械牡矸勖浮⒌鞍酌傅劝饷?。
?????? 酶溶液提?。阂鹊鞍酌傅奶崛?/p>
?????? 堿溶液提?。杭毦鶯—天冬酰胺酶
?????? 有機溶劑萃取：有機相、水相，多用于與脂質(zhì)可以牢固結(jié)合或者有較多極性基團的酶提取。
3）沉淀分離：
???? 鹽析：利用不同蛋白質(zhì)在不同溶液當中的溶解度不同進行分離，通過在酶溶液中加入一定濃度的鹽使酶或者雜質(zhì)析出沉淀，從而達到沉淀分離的作用。
?????? 等點點沉淀：利用兩性電解質(zhì)在等電點的溶解度最低，以及不同的良性電解質(zhì)有不同的等電點這個特征，通過調(diào)節(jié)溶液的pH，是沒或者雜質(zhì)析出。
?????? 有機溶劑沉淀法：利用酶或者其他雜質(zhì)在有機溶劑中的溶解度不同，通過添加一定量的有機溶劑，是沒或者雜志析出。
?????? 復合沉淀：在酶中加入某種物質(zhì)，使之與酶形成復合物，而沉淀下來。
?????? 選擇性變性沉淀：選擇一定條件使酶液中存在雜質(zhì)，并且不會影響酶的作用效果。
4）離心分離
?????? 差速離心：根據(jù)粒子大小、沉降系數(shù)等進行離心。
?????? 密度梯度離心：在密度梯度離心介質(zhì)（蔗糖、甘油）進行離心。
?????? 等密梯度離心：將介質(zhì)與樣品混合，由于各自的浮力上浮或者下沉。
5）膜分離：粗濾、微濾、超濾
3.蛋白質(zhì)的精細純化
1）色譜層析：吸附層析和分配層析（紙上層析和簿層層析）
2）不同層析的原理
3）分子排阻
4）離子交換層析
5）層析聚焦
6）疏水層析
4.高效液相色譜法
第七章 酶的性質(zhì)
1.酶的基本性質(zhì)
1）檢測
SED-PAGE
WB：是否為特異性蛋白
LC-MS/GC-MS：含量以及分子量
CD：研究蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)
紫外掃描/分光光度法：濃度
DSC：通過吸放熱的特殊點發(fā)生蛋白質(zhì)溶解點進行蛋白質(zhì)分子連接點的研究。
晶體結(jié)構(gòu)：冷凍電鏡
2）酶的基本性質(zhì)
酶活：是指在一定條件下酶催化反應(yīng)的能力
酶活力大小：一定條件下酶催化反應(yīng)的速率
酶單位：一定條件下一定時間內(nèi)將一定量的底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物所需要的酶量。
酶轉(zhuǎn)換數(shù)（Kcat）：一定條件下每秒鐘每個酶分子轉(zhuǎn)換的底物分子數(shù)來表示酶的反應(yīng)速率。
抑制劑：分子直接作用于酶，導致其催化效率較低的物質(zhì)叫做酶抑制劑。
3）酶學特征檢測
2.酶的穩(wěn)定性
金屬離子、底物、輔因子、其他相對低分子的分子質(zhì)量陪提的結(jié)合作用。
鹽橋、二硫鍵、氫鍵、
3.酶的變性機制
1）化學變性因素：
?????? 表面活性劑、去污劑：陰離子>陽離子>無離子
?????? 變性劑：脲和鹽酸胍
?????? 高濃度鹽：硫酸銨、酶穩(wěn)定劑
?????? 氰化鈉（紊亂劑）
?????? 有機溶劑
?????? 螯合
?????? 重金屬離子和巰基試劑
2）物理變性因素：熱、機械力、冷凍脫水、輻射作用
3）蛋白復性：不在完全不可逆失活的條件下，大多數(shù)蛋白質(zhì)可以復性。也就是重新具有酶的功能。
4）不可逆失活：
???? 蛋白質(zhì)水解酶和自溶作用：微生物或者外源蛋白水解酶的作用。
?????? 聚合作用：熱變性、二硫鍵重組
?????? 極端pH：啟動改變、交聯(lián)破壞氨基酸殘基
?????? 氧化作用：芳香族的側(cè)鏈氨基酸、蛋氨酸、半胱氨酸，胱氨酸殘基
4.酶的保存：保存條件狀態(tài)、溫度、水分、氧氣、保護劑。固定化、酶分子修飾
第八章 酶的保存
1.酶抑制劑
1）抑制劑：直接作用于酶使其翠花效率降低的分子。
2）酶抑制劑的應(yīng)用：治療或者有毒
抑制作用類型：分為可逆抑制和不可逆抑制，可逆抑制又可以分為競爭性抑制、非競爭性抑制和反競爭性抑制。
可逆抑制：可逆抑制是說對反應(yīng)的一直是可逆的，以酶促反應(yīng)來說，可逆性抑制劑與酶形成復合物，抑制酶與底物的作用。但是在相同條件下，復合物又可以分解成酶和抑制劑，分解后的酶仍然可以催化反應(yīng)的發(fā)生。
?????? 競爭性抑制：抑制劑與底物共同競爭美的同一個活性位點，從而干擾了底物與酶的結(jié)合。
?????? 非競爭性抑制：抑制劑可與酶的其他活性部位結(jié)合，但不會和底物競爭同一個活性部位。
?????? 反競爭性抑制：抑制劑不能與游離酶發(fā)生結(jié)合，但是可以與底物—酶的復合物發(fā)生結(jié)合，從而抑制酶促反應(yīng)。
不可逆抑制：共價修飾改變酶的結(jié)果，不可逆轉(zhuǎn)。大豆胰蛋白酶抑制劑只不可逆作用于多肽，青霉素亞砜只不可逆作用于內(nèi)酰胺酶。
3）酶抑制劑的應(yīng)用
神經(jīng)毒氣??乙酰膽堿酯酶
達菲競爭性抑制流感
第九章 動植物及其細胞產(chǎn)酶
1.動物細胞及動物細胞產(chǎn)酶
1）概述
?????? 動物組織中有些酶的含量很高，可以直接提取，利用動物細胞額方法也可以產(chǎn)生大量的酶
2）動物細胞產(chǎn)酶的特點：易獲取、動物來源、病毒、含量、純度不高、可持續(xù)性不長。
3）動物產(chǎn)酶舉例
?????? 蝸牛酶的提?。何伵Ｃ甘菑奈伵５泥履液拖乐兄脖坏幕旌厦?，含有纖維須眉，果膠酶，淀粉酶，蛋白酶等多種酶。
?????? 破殼，摘嗦囊，2-3倍緩沖液，過濾取濾液，凍干極為成品。
?????? 胰蛋白酶提取和精細純化。
?????? 豚鼠肝臟中 TG酶
4）動物細胞產(chǎn)酶特點：
用于功能蛋白的生產(chǎn)
生產(chǎn)緩慢
需要添加抗生素
對剪切力面干、培養(yǎng)條件苛刻
有些只能貼壁培養(yǎng)。
培養(yǎng)基復雜，需要血清或替代品，價格昂貴。
5）動物細胞培養(yǎng)工藝
懸浮培養(yǎng)、貼壁培養(yǎng)、固定化細胞培養(yǎng)
培養(yǎng)基：氨基酸、維生素、無機鹽、葡萄糖、生長因子、激素
溫度：36.5
6）重組蛋白表達
構(gòu)建表達載體
選擇合適的宿主細胞
有話培養(yǎng)基
優(yōu)化純化工藝
2.植物細胞產(chǎn)酶
1）概述半貼壁單層細胞室溫可以生長，表達的重組蛋白可溶，折疊正確有翻譯后修飾，有生物活性，比較容易分離，易于表達異源蛋白，安全
2）產(chǎn)酶方式
植物組織直接提取
愈傷組織培養(yǎng)
轉(zhuǎn)基因植物
植物細胞培養(yǎng)
原生質(zhì)體培養(yǎng)
3）植物細胞培養(yǎng)
細胞體積大，營養(yǎng)條件相對簡單，產(chǎn)率提高，所短周期，易于管理、需要的條件較多（外界條件，修剪等）
4）植物組織培養(yǎng)
選擇和處理外植體，分離細胞，愈傷組織誘導培養(yǎng)、細胞培養(yǎng)、原生質(zhì)體再生培養(yǎng)
5）示例：蒜素和蒜酶超氧化物歧化酶、木瓜蛋白酶（提取煉乳，凝固，陳江，干燥、麥芽糖酶。
