基因編輯-慢病毒包裝系統(tǒng)的簡(jiǎn)介及應(yīng)用

一、慢病毒包裝系統(tǒng)簡(jiǎn)介

慢病毒(Lentivirus)載體是以 HIV-1(人類免疫缺陷 I 型病毒)為基礎(chǔ)發(fā)展起來(lái)的基因治療載體,對(duì)分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞均具有感染能力。該載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上,從而達(dá)到持久性表達(dá)。在感染能力方面可有效地感染神經(jīng)元細(xì)胞、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞。

二、慢病毒包裝原理

慢病毒表達(dá)載體(轉(zhuǎn)移載體)包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)??商峁┧械霓D(zhuǎn)錄并包裝shRNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒同時(shí)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞,在細(xì)胞中進(jìn)行病毒的包裝,包裝好的假病毒顆粒分泌到細(xì)胞外的培養(yǎng)基中,離心取得上清液后,可以直接用于宿主細(xì)胞的感染,目的基因進(jìn)入到宿主細(xì)胞之后,經(jīng)過(guò)反轉(zhuǎn)錄,整合到基因組,從而高水平的表達(dá)效應(yīng)分子。

下圖用的是三質(zhì)粒慢病毒包裝系統(tǒng)。

三、慢病毒包裝系統(tǒng)的應(yīng)用

1. 對(duì)于一些較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,如原代細(xì)胞、干細(xì)胞、不分化的細(xì)胞等,能大大提高目的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,而且目的基因整合到宿主細(xì)胞基因組的幾率大大增加;

2. 進(jìn)行穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的篩選;

3. 為活體動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)提供高質(zhì)量的包含目的基因的病毒液;在細(xì)胞相關(guān)的實(shí)驗(yàn)操作中,對(duì)于一些按常規(guī)方法難以轉(zhuǎn)染甚至無(wú)法轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,通過(guò)病毒介導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)?zāi)軌虼蟠筇岣呋虻霓D(zhuǎn)導(dǎo)效率,以達(dá)到目的基因的高效瞬時(shí)表達(dá)。


以上,給大家分享了慢病毒包裝系統(tǒng)的簡(jiǎn)介及應(yīng)用,后續(xù)的話會(huì)再專門針對(duì)慢病毒包裝的實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)給大家分享一下。

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