雙熒光素酶報告基因技術(shù)（Dual-Luciferase Reporter Assay, DLR）是一種高靈敏度、雙報告系統(tǒng)的生物發(fā)光技術(shù)，核心是在同一細(xì)胞中同時表達螢火蟲熒光...
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高分案例教你如何應(yīng)用雙熒光素酶技術(shù)
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腺相關(guān)病毒/AAV包裝技術(shù)AAV 包裝核心是三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染 HEK293T 細(xì)胞，在無輔助病毒條件下原位組裝出攜帶目的基因的重組 AAV 顆粒，兼具高安全性、低免疫原性、長期表達等優(yōu)勢，是體內(nèi)外基因遞送...
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【慢病毒包裝技術(shù)】完整實驗流程慢病毒包裝是借助宿主細(xì)胞組裝復(fù)制缺陷型慢病毒顆粒，用于體外細(xì)胞、體內(nèi)基因遞送的常用分子實驗技術(shù)，廣泛應(yīng)用基因敲入、沉默、過表達研究。 一、核心原理 依托三代四質(zhì)粒系統(tǒng)，將目的...
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【AAV靶向內(nèi)耳】啟動子的選擇
耳朵分為外耳、中耳和內(nèi)耳三部分，其中外耳和中耳傳導(dǎo)聲波，內(nèi)耳是聽覺和位覺感受器。在結(jié)構(gòu)上，外耳包括耳廓和外耳道，中耳由鼓膜、鼓室及聽骨鏈組成，內(nèi)耳位于顳骨巖部內(nèi)，包括半規(guī)管、...
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堿裂解法提取質(zhì)粒DNA的原理及操作步驟
堿裂解法是小量制備DNA 較好的方法。基本原理是利用質(zhì)粒較小且為超螺旋共價閉合環(huán)狀分子的特點，它與染色體DNA 在拓?fù)鋵W(xué)上有很大差異來分離。即在堿性 pH (12～12.5)...
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科研速記：轉(zhuǎn)座子分類+結(jié)構(gòu)特征匯總
轉(zhuǎn)座子(transposon,Tn) 是存在于染色體 DNA上可自主復(fù)制和位移的基本單位。轉(zhuǎn)座子存在于所有的生物體內(nèi)，人類基因組中有35%以上的序列為轉(zhuǎn)座子序列，其中大部分與...
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搞懂順式作用元件，先從這篇基礎(chǔ)科普開始！
很多學(xué)分子生物學(xué)、做科研的同學(xué)，經(jīng)常碰到順式作用元件這個概念，但一直分不清它到底是什么、在哪、有什么用，還容易和反式作用因子搞混。今天用通俗好懂的語言，把順式作用元件的核心定...
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什么時候選擇慢病毒載體？
慢病毒（Lentivirus）是一類改造自人免疫缺陷I型病毒的病毒載體，是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，基因組是單鏈RNA。區(qū)別于腺病毒和腺相關(guān)病毒，慢病毒能夠介導(dǎo)外源基因整合至宿主基因...
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做腎臟基因干預(yù)，AAV 注射哪種方式成功率更高？給藥途徑的選擇是基因治療有效性的重要決定因素。哺乳動物的腎臟具有嚴(yán)格的過濾功能，排斥大于50kDa的蛋白質(zhì)，此外，腎小球內(nèi)的足細(xì)胞形成直徑僅為10nm的狹縫橫膈膜，傳統(tǒng)的AA...
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肺部AAV注射怎么打？AAV感染肺部的方法有多種，較為常用的方法有鼻內(nèi)滴注法、氣管插管術(shù)、氣管內(nèi)注射，如果對肺部感染AAV的特異性要求較低，也可采用靜脈注射、腹腔注射等方法，當(dāng)進行肺癌成瘤實驗時，...
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重磅合作！維真生物獲信念醫(yī)藥頂尖基因治療AAV血清型獨家授權(quán)全球基因治療賽道迎來爆發(fā)式增長，腺相關(guān)病毒（AAV）作為基因遞送核心載體，其血清型的性能直接決定治療效果與安全性，新型AAV血清型研發(fā)是突破技術(shù)瓶頸、推動臨床應(yīng)用的關(guān)鍵。全球...
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神經(jīng)科學(xué)必備：鈣成像技術(shù)到底是什么？
細(xì)胞（尤其神經(jīng)元、心肌細(xì)胞）活化時，胞內(nèi)鈣離子濃度會快速瞬時升高，鈣離子可作為細(xì)胞興奮、信號傳導(dǎo)的天然標(biāo)志物；鈣成像利用這一特性，通過熒光探針捕捉鈣信號變化，將細(xì)胞電活動 /...
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CRISPR/Cas13系統(tǒng)的作用機制CRISPR/Cas13 系統(tǒng)是目前發(fā)現(xiàn)的能夠靶向 RNA 的 CRISPR 系統(tǒng)，該系統(tǒng)的發(fā)現(xiàn)擴展了 CRISPR 系統(tǒng)在病毒干擾方面的應(yīng)用。新發(fā)現(xiàn)的 Cas13 蛋白第四...
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siRNA 是如何調(diào)控基因的？在分子生物學(xué)與基因研究的浪潮中，RNA 干擾（RNAi）技術(shù)憑借其精準(zhǔn)的基因調(diào)控能力，成為科研領(lǐng)域的重要工具，而siRNA（小干擾 RNA） 作為 RNAi 通路的核心執(zhí)行者...
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RNA 編輯利器：CRISPR/Cas13 系統(tǒng)概述RNA 作為一種重要的生物大分子，參與細(xì)胞生命代謝的整個過程，其代謝異常會導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。 與相對穩(wěn)定遺傳的 DNA 不同，RNA 引起的改變是暫時的、非永久性的，但是 ...
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什么是 dCas9？和普通 Cas9 到底有什么區(qū)別？一篇看懂dCas9（dead Cas9）是 Cas9 蛋白的突 變 體， 即 因 Cas9 的 RuvC1 和 HNH 兩個核酸酶活性區(qū)域同時發(fā)生突變產(chǎn)生，其剪切酶活性喪失，只保留了...
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做基因遞送實驗，腺病毒、慢病毒、AAV 該選哪個？對于轉(zhuǎn)染困難的細(xì)胞，科研工作者通常會選擇病毒來導(dǎo)入目的基因。目前，腺病毒、慢病毒和腺相關(guān)病毒是常用的病毒載體工具。那么如何選擇適合您實驗體系的病毒工具，請參考下面3種病毒工具...
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腺病毒載體使用指南：什么情況下優(yōu)先用它做基因遞送？
腺病毒載體能感染分裂和非分裂細(xì)胞。它適用于體內(nèi)和體外基因傳遞，轉(zhuǎn)染效率高，對外源基因瞬時表達量高。但相對于其他病毒載體系統(tǒng)，腺病毒載體在靶細(xì)胞中具有相對較高的免疫原性。您應(yīng)考...
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AAV 在肝臟中的遞送方式有哪些？肝臟對全身應(yīng)用AAV有較高的親合性，AAV在肝臟中的注射方式分為直接傳送和外周傳送兩種（下表所示），其中尾靜脈注射和腹腔注射是目前應(yīng)用比較廣泛的注射方式，操作者也可根據(jù)實驗?zāi)?..